1、不同濃度分離液的制備: 

先用9份分離液與1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓，然后用生理溶液稀釋到所需濃度。

2、不連續(xù)密度梯度層的制備: 

先將試管壁用牛血清濕潤(rùn)，除去多余血清，這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。

在制備過程中一般用長(zhǎng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時(shí)相鄰兩層比重相差不大時(shí)，可將液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。

3、裝樣：

樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異，一般加樣體積不宜過大，細(xì)胞濃度也不可過高，否則會(huì)影響細(xì)胞的分離和回收。

4、離心：

一般采用離心力為400g，時(shí)間20～25min。

由于多層之間密度差別不大，因此離心機(jī)加速、降速時(shí)要慢，要平穩(wěn)。

5、取樣：

當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時(shí)，可逐層去除液后收集界面部位的細(xì)胞;有時(shí)大部分細(xì)胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測(cè)用。

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